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关于血清蛋白电泳——您知道多少(一)检测技术

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      血清蛋白电泳(serum poteinelectrophoresis,SPE)是利用蛋白质的等电点和分子大小的不同,在同一PH值缓冲液中所带电荷的差异性,在电场中泳动速度和方向不同,使不同的蛋白质分子具有不同的电泳迁移率,从而把血清蛋白分为不同的区带,然后不同的区带进行定量分析。

检测方法

      血清电泳的检测方法有多种,有Tiselius自由电泳,醋酸纤维素膜电泳,琼脂糖凝胶电泳,淀粉胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳,浓度梯度板状胶电泳,微型双向电泳,毛细管电泳等。电泳方法不同,分离血清蛋白的能力则有很大差异。目前,临床实验室检测中采用的琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳。

1琼脂糖凝胶电泳法检测血清蛋白电泳:

      琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大(98-99%),近似自由电泳,因为固体支持物的影响少,故电泳速度快,区带整齐。而且由于琼脂糖不含带电荷的基团,电渗影响很少,是一种较好的电泳材料,分离效果较好。

      琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。将血清蛋白样本通过加样梳点在琼脂糖凝胶上然后将凝胶置于电场中,此时血清中的不同蛋白质就会在电场中发生移动,在电泳结束时根据使用缓冲液的不同,蛋白质被分五个区带或六个区带,然后将凝胶烘干,使用对蛋白亲和力强的氨基黑燃料进行染色,通过光密度仪或扫描仪对各个区域的蛋白检测,从而得到血清蛋白各组分的百分比浓度,也可以测定总蛋白的浓度后,计算出各个区带的浓度值。


2.  毛细管电泳法检测血清蛋白电泳:

     毛细管电泳(Caillary Electrophoresis)简称CE,是一类以毛细管为分离通道,以高压直流场为驱动力的新型液相分离分析技术。毛细管电泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出,他们使用了75mm的毛细管柱,用荧光检测器对多种组分实现了分离。

     毛细管电泳和高效液相色谱(HPLC)一样,同是液相分离技术。无论从效率、自动化、检测速度、样品用量和成本来说,毛细管电泳都显示了一定的优势。毛细管电泳(CE)除了比其它色谱分离分析方法具有效率更高、速度更快、样品和试剂耗量更少、应用面同样广泛等优点外,其仪器结构也比高效液相色谱(HPLC)简单。

血清蛋白在使用毛细管电泳检测后可以得到六个区带,即将血清蛋白分为六个组分。


分类及参考区间

     1. 琼脂糖凝胶法分类:目前临床实验室使用琼脂糖凝胶电泳检测血清蛋白电泳主要分为5个区带。具体分类与参考区间见下表:


     2. 毛细管电泳法分类:血清蛋白电泳主要分为6个区带。具体分类与参考区间见下表:


临床应用

      血清蛋白常被用做作为下列疾病监控和诊断。

      1.急性感染性疾病

      2.慢性感染性疾病

      3.蛋白丢失类疾病,如肾脏疾病、胃肠道疾病、皮肤类疾病(烧伤病人)、渗出液和漏出液相关疾病、肝脏疾病等

      4.单克隆免疫球蛋白血症(多发性骨髓瘤等疾病)

      5.在常规实验室可以观察到的异常结果。红细胞沉降率加快,蛋白尿,血清总蛋白浓度增高或降低。